实验技术
真菌培养基
发布时间:2013年11月19日   作者:管理员    阅读次数:915

一、沙保罗琼脂培养基

[用途]

供真菌及酵母样真菌的分离培养用。

[配法]

麦芽糖40g,蛋白胨10g,琼脂20g蒸馏1L             

  将上述成分溶于水,加热溶解,调pH6.0±0.2,分装三角瓶或试管中,118℃灭菌15min,倾注平板或置斜面,无菌试验后备用。

[用法]

   将标本接种培养基,如系血液标本,则采取12ml,与冷却至45℃左右沙保琼脂混合,倾注接种平板。分别置35℃25℃恒温箱内同时培养。35℃培养48h,25℃需连续培养5,逐日观察结果。发现真菌及酵母样可疑菌落,转种沙保菌斜面,获得纯培养后进行鉴定。

[质量控制]

   白色念珠菌和新型隐球菌生长良好。

注:

本培养基如不加入琼脂,即为沙保罗液体培养基,供真菌及念珠菌的增菌培养用。

增加氯霉素0.050.125mg/ml或放线菌酮0.5mg/ml,可抑制细菌和污染的霉菌及隐球菌生长。此二种药均耐热,可直接加入培养基内高压灭菌。

添加酵母浸膏5mg/ml,可促进皮肤癣菌生长。增加维生素B 0.1mg/ml,可促进紫色癣菌和断发癣菌生长。

将麦芽糖减少到20g/L,为沙保罗20g/L麦芽糖琼脂培养基,可供诱导真菌产生孢子用。

该培养基呈酸性,应提高20%的琼脂用量。

二、玉米粉琼脂培养基

[用途] 

鉴定酵母样真菌用。白色念珠菌在该培养基上25℃24h培养可长出假菌丝,顶端有典型的厚壁孢子,可与其它念珠菌鉴别。

[配法]

 玉米粉4g,琼脂粉8g蒸馏1LpH6.0±0.2)。

 将细米粉加水浸泡数分钟,扎紧瓶口,浸入60℃水浴4h,取出后用沙布过滤,除去粗渣,补足水分。无须调整pH。加入琼脂,煮沸溶解,有沉淀物再过滤1次,分装试管121℃灭菌15min备用。

用玻璃片法点种后,置平皿内,保持一定湿度,置2326℃下培养2448h。取出玻片培养物,用高倍镜观察真假菌丝和有无厚壁孢子。

[质量控制]

白色念珠菌(ATCC 26790)厚膜孢子阳性;新型隐球菌(ATCC 9763)厚膜孢子阴性。

注:

玉米粉可用糯米粉或可溶性淀粉代替,效果相同。

该培养基加入10ml/L Tween-80,制成玉米粉Tween-80琼脂,用途相同,效果更好。